EGF和bFGF联合诱导人脐血MSCs向神经细胞分化过程中端粒酶活性的变化

作者：秦洁; 曹孟德; 许予明; 邢莹; 陈宗德; 鄢文海; 韩雪飞; 许燕; 龚光明

来源：郑州大学学报(医学版), 2004, (06): 956-960.

DOI：10.13705/j.issn.1671-6825.2004.06.012

• 脐血
• 间充质干细胞
• 神经分化
• 端粒酶

目的 :检测重组人表皮生长因子 (EGF)和碱性成纤维生长因子 (bFGF)联合诱导人脐血间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化过程中端粒酶活性的变化 ,以探讨人脐血MSCs的增殖性和安全性 ,为其临床应用提供实验和理论依据。方法 :采集健康自然分娩产妇志愿捐献的脐血 ,密度梯度离心分离单个核细胞 ,接种于含体积分数为2 0 %胎牛血清的DMEM/F12中 ,对照组不加细胞因子 ,实验组加入EGF和bFGF ,终浓度均为 10 μg/L ,剩余细胞用液氮冻存。培养 2 4h后倾去全部液体以去除未贴壁细胞 ,以后每 3d全量换液 1次。分别收集培养 1d、4d、7d、10d、14d、2 1d的贴壁细胞和冻存细胞 ,将细胞密度调整一致 ,采用反转录 -多聚酶链反应 (RT -PCR)方法检测脐血MSCs培养前后各时间段的巢蛋白 (nestin)和神经丝亚单位M(NF -M)mRNA表达 ;采用端粒重复序列扩增 -酶联免疫吸附实验 (TRAP -ELISA)法检测人脐血MSCs向神经细胞分化过程中的端粒酶活性变化。结果 :RT -PCR检测发现 ,未培养的脐血细胞nestin、NF -MmRNA均呈阳性表达 ;培养后NF -MmRNA的表达随培养时间延长而增强(P <0 .0 1) ;实验组与对照组相比 ,细胞因子能明显促进NF -MmRNA的表达 (P <0 .0 1)。而nestinmRNA的表达随培养时间延长而下降 (P <0 .0 1) ,至第 7d已不能检出 ;T

• 单位
  第一附属医院神经内科; 基础医学院; 郑州大学