鼠疫耶尔森菌Pla毒力蛋白的表达、纯化及其活性研究

作者：范艳晓; 周亚洲; 冯娜; 汪琼; 毕玉晶; 韩延平; 杨瑞馥; 王效义

来源：军事医学, 2015, 39(09): 677-681+687.

• 鼠疫耶尔森菌
• 纤维蛋白酶原激活剂
• 表达
• 纯化

目的制备鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)重组纤溶酶原激活剂(Pla)蛋白,为研究鼠疫菌蛋白之间相互作用和鼠疫的免疫学诊断奠定基础。方法应用PCR从鼠疫菌基因组中扩增pla基因,将其克隆到p ET28a表达载体中;转化大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达;SDS-PAGE电泳检测表达结果;应用8 mol/L尿素将包涵体变性,梯度稀释透析法将其复性,SDS-PAGE电泳和Western印迹检测目的蛋白;奶粉平板法检测纤溶酶原激活剂活性。结果与结论琼脂糖凝胶电泳和测序结果证明表达质粒构建成功;SDS-PAGE电泳结果表明Pla蛋白以包涵体形式表达,表达产物主要为目的蛋白,且目的蛋白的表达量较高;包涵体经变性、复性得到了电泳纯Pla蛋白,并具有纤溶酶原激活剂活性。该研究提供了一种简单、快速、高效制备具有活性的Pla蛋白的方法。

• 单位
  安徽医科大学; 军事医学科学院; 病原微生物生物安全国家重点实验室