摘要
目的 研究COL3A1在胃癌细胞增殖、迁移及侵袭过程中的作用。方法 以靶向COL3A1的干扰慢病毒(3个靶点)及阴性对照慢病毒转染胃癌细胞株MGC803,嘌呤霉素筛选稳转细胞株。qRT-PCR验证转染后MGC803细胞中COL3A1的mRNA表达,筛选出2个转染效率最高的细胞株,再以Western blot法进一步检测转染后胃癌细胞中COL3A1的蛋白表达量。采用MTT、Transwell法检测COL3A1干扰组、对照组胃癌细胞增殖、侵袭、迁移表型,观察COL3A1敲减前后胃癌细胞生物学特性的变化。结果 (1)COL3A1的mRNA表达水平在胃癌细胞转染shRNA-COL3A1慢病毒后出现显著下降,其中抑制效果最好的是shRNA 1组(P<0.01)、shRNA 3组(P<0.001);重新分组后行Western blot法,发现与NC组相比,shRNA 1组、shRNA 2组COL3A1蛋白表达均下降,其中shRNA 2组抑制效果更显著(P<0.01);(2)MTT结果显示,shRNA-COL3A1慢病毒转染后48h胃癌细胞的生长被明显抑制,在各时间点吸收值均低于NC组(P<0.05),其中shRNA 2组最明显(P<0.0001);(3)通过Transwell小室对shRNACOL3A1胃癌细胞迁移能力进行检测,发现shRNA-COL3A1转染后,shRNA 1组(P=0.0029)及shRNA 2组(P<0.0001)胃癌细胞的迁移能力显著降低,其中以shRNA 2组最为显著(P<0.0001);(4)通过Transwell小室检测shRNA-COL3A1胃癌细胞侵袭能力,发现shRNA 1组(P=0.0046)及shRNA 2组(P=0.0002)胃癌细胞的侵袭能力均显著下降,其中shRNA 2组最为显著(P<0.001)。结论 敲减COL3Al基因可有效抑制胃癌细胞的增殖、侵袭及迁移,COL3Al在胃癌发生发展中发挥了重要作用。
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单位内蒙古自治区人民医院