基于MAPK信号通路研究艾柱燃烧产物减轻蓝光诱导ARPE-19细胞损伤的作用机制

作者：陈如一; 黄妍; 徐文静; 赵鑫钰; 夏道宗^*

来源：中草药, 2022, 53(11): 3376-3384.

• 艾柱燃烧产物
• ARPE-19
• 蓝光
• 氧化应激
• 丝裂原活化蛋白激酶信号通路

目的 探讨艾柱燃烧产物（moxa smoke extract,MSE）对蓝光诱导人视网膜色素上皮（adult retinal pigment epithelium-19,ARPE-19）细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法 体外培养ARPE-19细胞，CCK-8法检测不同质量浓度（0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、5.00、10.00、50.00、100.00、150.00μg/mL）MSE对ARPE-19细胞活力的影响。设置对照组、对照+MSE高剂量组、蓝光组、蓝光+叶黄素组、蓝光+MSE低剂量组和蓝光+MSE高剂量组。对照组和蓝光组加入空白培养基，其余4组分别加入相应的含药培养基干预24 h后，除对照组以及对照+MSE高剂量组外，各组均在蓝光（430 nm,96.1 W/m2）下刺激1 h。建立ARPE-19细胞损伤模型后，采用乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）法检测质膜完整性；采用倒置荧光显微镜观察细胞形态学变化；采用流式细胞仪检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平；采用试剂盒检测细胞内氧化应激指标丙二醛（malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽（glutathione,GSH）水平和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、过氧化氢酶（catalase,CAT）以及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性；采用Western blotting法检测丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPK）信号通路相关蛋白表达。结果 与对照组相比，MSE(0.25～4.00μg/mL)对ARPE-19细胞活力没有显著影响。与蓝光组相比，MSE可以显著降低培养上清中的LDH活性（P<0.01），减轻质膜损伤以及细胞形态学变化，调节MAPK信号通路关键蛋白Ras、磷酸化c-Raf(phosphorylated c-Raf,p-c-Raf)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(phosphorylated extracellular regulated protein kinase 1/2,pErk1/2)、磷酸化丝裂原活化的细胞外信号调节激酶1/2(phosphorylated mitogen-activated extracellular signal-regulated kinase1/2,p-MEK1/2)和p-p38 MAPK表达（P<0.05、0.01），调节细胞内SOD、CAT、GSH-Px活性以及GSH、MDA、ROS水平（P<0.05、0.01），改善ARPE-19细胞氧化应激反应。结论 MSE可能通过调控ROS介导的MAPK信号通路相关蛋白的表达，对蓝光诱导的ARPE-19细胞氧化应激损伤起保护作用。

• 单位
  浙江中医药大学