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摘要
目的 研究淫羊藿女贞子含药血清合用地塞米松对自噬激活剂雷帕霉素（Rap）诱导的气道平滑肌细胞（ASMCs）自噬、凋亡及增殖活性的影响。方法 培养大鼠原代ASMCs，随机分为5组，即正常组（正常大鼠血清）、Rap组（正常大鼠血清+Rap）、激素组（正常大鼠血清+地塞米松+Rap）、中药组（Rap+淫羊藿、女贞子含药血清）、合用组（Rap+淫羊藿、女贞子含药血清+地塞米松）。根据分组分别加入正常大鼠血清或含药大鼠血清；除正常组外，其余各组同时加入Rap刺激ASMCs,48 h后进行检测。电镜观察细胞超微结构；MTT法检测细胞活力；免疫细胞化学法检测增殖蛋白Ki-67蛋白表达并评价细胞增殖活性；Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡活性；Western blotting检测LC3蛋白相对表达；细胞免疫荧光法检测Bax、Bcl-2、Beclin-1、P53、Caspase-3、mTOR、p-mTOR蛋白表达。结果 激素可协同Rap诱导ASMCs自噬活性增加，使LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值进一步增加，下调p-mTOR表达，但对Beclin-1及m TOR表达无影响，抑制ASMCs细胞活力及增殖活性，可增加凋亡水平，上调Bax、Caspase-3及P53表达，下调Bcl-2表达。中药组及合用组均能显著抑制Rap诱导的ASMCs自噬，下调LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值及Beclin-1蛋白表达，并改善Rap导致的细胞活力、增殖活性降低。此外中药能抑制凋亡活性升高，上调Caspase-3蛋白表达，下调P53蛋白表达；中西药合用能下调p-mTOR蛋白表达，但对凋亡活性无显著影响。与激素单用比较，合用组下调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值，调节ASMCs细胞活力、增殖活性及凋亡活性均有统计学差异（P <0.05或P <0.01）。结论 中药联合糖皮质激素可抑制激素协同Rap诱导的ASMCs过度自噬状态，并改善被抑制的细胞活性，使ASMCs趋于正常。
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