伪狂犬病病毒变异株UL43和UL56基因失活株的构建与生物学特性分析

作者：吕家轩; 张传健; 王志胜; 何青; 王继春^*; 费荣梅^*

来源：中国动物传染病学报, 2022, 30(06): 34-41.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.2022.06.002

• 伪狂犬病病毒
• 细菌人工染色体
• UL43
• UL56
• 点突变
• 生物学特性

为探究UL43与UL56基因失活对伪狂犬病病毒(PRV)变异株毒力的影响，本研究基于伪狂犬病病毒(PRV)变异株AH02LA细菌人工染色体(BAC)BACPRV-G，应用En Passant操作技术，分别将UL43与UL56基因的起始密码子进行点突变，获得两株重组BAC株：BACPRV-G-UL43mut与BACPRV-G-UL56mut。之后将携带同源臂的PRV AH02LA gE/gI基因分别于BACPRV-G-UL43mut和BACPRV-G-UL56mut共转染猪睾丸(ST)细胞，从而获得重组病毒PRV-UL43mut和PRV-UL56mut。生长动力学试验显示PRV-UL43mut病毒滴度在感染后12 h有升高趋势，表明UL43基因可能在感染细胞早期抑制病毒增殖；PRV-UL56mut与亲本毒株PRV AH02LA生长动力学相似，表明UL56基因对病毒生长性能无显著影响。荧光定量PCR试验发现UL56基因可抑制感染细胞早期主要组织相容性复合物Ⅰ类分子的转录。此外，小鼠致病力试验显示，相较于亲本毒PRV AH02LA(LD50=10-3.26/0.2mL),PRV-UL43mut(LD50=10-2.63/0.2 mL)与PRV-UL56mut(LD50=10-2.19/0.2 mL)对小鼠的致病力均降低，表明UL43基因与UL56基因可能介导病毒对小鼠的致病性。本研究成功构建了PRV变异株UL43、UL56基因失活株，为进一步揭示PRV免疫逃逸的机制奠定基础，也为研制更加安全有效的PRV弱毒疫苗提供理论依据。

• 单位
  江苏省农业科学院; 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心