靶向Smad4基因shRNA质粒表达载体的构建及筛选

作者：张彩平; 龙石银; 田英; 何云武; 崔慧辉; 王思远

来源：现代生物医学进展, 2010, (17): 3212-3215.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2010.17.002

• RNA干扰
• Smad4基因
• 基因克隆
• 鉴定 short hairpin RNA
• Smad4 gene
• RNA interference
• plasmid expression vector

目的:构建编码Smad4 mRNA的shRNA真核表达载体,并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。方法:根据GenBank提供的人Smad4基因的mRNA序列构建2个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体,并通过基因测序进行鉴定。经鉴定后转染体外培养人成纤维细胞,western-blot检测Smad4蛋白水平抑制表达效果。结果:构建质粒表达载体测序结果显示,插入片段测序结果与合成的shRNA序列一致;靶向Smad4基因shRNA质粒表达载体对所转染的人成纤维细胞中Smad4蛋白水平表达均有抑制作用,其中shRNA1最为明显。结论:成功构建了靶向Smad4基因shRNA质...

• 单位
  南华大学; 南华大学附属第二医院