沉默Kif5b赋予MDCK细胞干性

作者：崔菊; 金国祥; 雷霆; 王在; 黄建东; 蔡剑平

来源：医学研究杂志, 2016, 45(05): 58-62.

DOI：10.11969/j.issn.1673-548X.2016.05.014

• Kinesin-1
• MDCK细胞
• 上皮细胞-间充质转化
• 间充质干细胞

目的观察沉默Kif5b对上皮细胞MDCK的影响并探讨Kif5b表达水平与细胞分化程度的相关性。方法设计构建靶向Kif5b基因的短发卡RNA(shRNA)质粒载体,并转染犬肾上皮细胞株MDCK,检测其对Kif5b表达的抑制作用;采用Western blot法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin),N-钙黏蛋白(N-cadherin),波形蛋白(vimentin)在各组细胞中的表达差异;通过细胞诱导液培养检测细胞分化为脂肪细胞和成骨细胞的能力。结果从形态上看,对照组MDCK细胞间紧密相连,呈鹅卵石状分布,而Kif5b沉默的细胞呈成纤维细胞状;与对照组相比,转染Kif5b-shRNA显著抑制Kif5b的表达,同时E-cadherin的表达下降,N-cadherin和vimentin的表达上升,细胞抵抗胰蛋白酶消化的能力降低;沉默Kif5b的MDCK细胞能被分化为脂肪细胞和成骨细胞;此外,Kif5b在MDCK中的表达量显著高于小鼠间充质干细胞(mesenchymal stem cell)。结论在MDCK细胞中沉默Kif5b诱导MDCK细胞经历上皮细胞-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition)过程,去分化为间充质干细胞样细胞,去分化的细胞能够被转分化为特化的脂肪细胞和成骨细胞。Kif5b的表达量与细胞的分化程度呈正相关。

• 单位
  卫生部北京老年医学研究所; 中日友好医院; 中国科学院深圳先进技术研究院; 临床医学研究所; 北京医院