北细辛AhWRKY33基因的克隆及其拟南芥遗传转化

作者：杨永成; 王潇晗; 王艳芳; 刘秀岩; 杨世海^*

来源：中国中药杂志, 2020, 45(13): 3112-3119.

DOI：10.19540/j.cnki.cjcmm.20200329.107

• 北细辛
• WRKY基因
• 植物表达载体
• 遗传转化

根据北细辛全长转录组测序数据,选择在植物形态发生及应对逆境胁迫中发挥重要作用的WRKY家族基因,用在模式植物拟南芥中调控抗毒素camalexin合成的AtWRKY33比对同源基因,设计引物,以北细辛叶总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增得到AhWRKY33基因开放阅读框(ORF)片段,实时荧光定量PCR结果表明其在北细辛地上和地下部分有显著的表达差异,AhWRKY33在毒性成分马兜铃酸含量较根中高的叶片中有较高的表达量。经验证,北细辛WRKY33基因ORF全长1 686 bp,编码561个氨基酸。北细辛WRKY33有2个保守的WRKYGQK结构域,按经典的分类方法来说,属于Ⅰ组WRKY转录因子,与其他物种氨基酸具有一定的同源性。该研究成功构建植物真核表达载体PHG-AhWRKY33并转化拟南芥,经过PCR检测和潮霉素(Hyg)抗性平板的筛选获得了转基因拟南芥。发现加快了转基因拟南芥种子的萌发,提高了植株的抗逆性。这为继续深入分析WRKY转录因子在北细辛生长发育和次生代谢产物合成中的功能奠定了基础。

• 单位
  吉林农业大学; 北京中医药大学; 国家中医药管理局