高糖对树突状细胞分化成熟和免疫功能的影响及其机制

作者：涂亚芳^*; 吴雄飞; 王娟; 蔡治涛; 廖雯靓; 李敛

来源：中华糖尿病杂志, 2019, 11(09): 624-629.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1674-5809.2019.09.011

• 糖尿病肾病
• 树突细胞
• NF-κB
• 免疫炎症反应

目的 探索树突状细胞(DCs)在高糖环境下分化、成熟、免疫功能的影响及其发生机制,以期进一步探索DCs在糖尿病肾病发病中的作用。方法 取小鼠骨髓单个核细胞,在含重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF,20 ng/ml)和重组人白细胞介素-4(rhIL-4,10 ng/ml)的完全培养基中培养,第7天收集不成熟DCs分别在含有5.5 mmol/L D-葡萄糖、30 mmol/L D-葡萄糖、30 mmol/L D-葡萄糖+100 μg/ml核因子κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)的RPMI1640完全培养基中继续培养48 h后,采用流式细胞术检测DCs表型；以DCs为刺激细胞、同种异体T淋巴细胞为反应细胞按比例混合后,以混合淋巴细胞反应强度观察对树突状细胞抗原递呈、淋巴细胞增殖、淋巴细胞凋亡的影响；ELISA法检测细胞培养上清细胞因子浓度；Western blot检测核因子κB(NF-κB)活化程度。采用Student-t检验分析各组之间差异的显著性。结果 与正常对照组相比,30 mmol/L D-葡萄糖能明显增加DCs内NF-κB的活化(IκBɑ：0.29±0.18比0.69±0.79,t=-1.27；p65∶0.87±0.18比0.35±0.13,t=2.19；均P<0.01),显著上调DCs表面标志CD1 1c、主要组织相容性复合体Ⅱ类分子、CD80、CD86、CD40的表达(t=8.97～10.45,均P<0.05),增强了T淋巴细胞的增殖作用(1∶100时1.80±0.23比1.57±0.20,t=2.46；1∶25时1.74±0.17比1.32±0.18,t=2.82；1∶10时1.59±0.25比1.28±0.19,t=3.06；均P<0.05)、减低了T淋巴细胞的凋亡比率(12.0±2比44.0±12.3,t=4.03,P<0.05),并且促进DCs分泌细胞因子白细胞介素12(IL-12)、γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)(t=3.68～7.68,均P<0.05)；而NF-κB抑制剂PDTC则可不同程度阻断上述作用(均P<0.05)。结论 高糖能够显著增加NF-κB的活化进而促进DCs的成熟,成熟DCs加速和放大了炎症免疫反应,这可能是DCs参与糖尿病肾病的重要机制之一。

• 单位
  武汉大学人民医院