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摘要
目的:研究5种口腔细菌在体外形成生物膜的能力、形成过程及不同培养条件对生物膜形成的影响,并通过激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察细菌生物膜的形成及结构特征。方法:选择与龋病发生关系密切的5种口腔细菌,分别接种在含牛心脑浸液培养基(BHI)、人工唾液(BM5)以及人唾液培养基的标准96孔板中,在培养6 h、8 h1、2 h2、4 h3、6 h4、8 h和60 h后取出相应的微孔板,11%Crystal Violet染色生物膜,95%乙醇复吸CrystalViolet,HTS7000PLUS多孔板高效分析仪测定各时段细菌生物膜的生长情况,并绘制生长曲线。CLSM观察细菌生物膜形成的结构变化。结果:在BHI及BM5中5种口腔细菌均能形成生物膜,在人唾液中没有形成生物膜。细菌生物膜形成表现为缓慢的非线性生长,出现了一个相对的生长停滞期,这个时期出现在36~48 h之间,不同细菌略有差别。激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察发现在培养6 h后仅有少量细菌粘附形成散在微菌落,24 h后出现生物膜的基本结构,48 h形成成熟的生物膜。结论:研究发现在体外细菌形成生物膜的能力与培养基条件密切相关,细菌生物膜形成缓慢,其间有一个相对生长停滞期。细菌定植,粘附,共集聚是生物膜形成的重要步骤。
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