水蛭提取物对电离辐射诱导的肺泡上皮细胞TGF-β/Smad通路及上皮间质转化影响

作者：杨吉帆; 张涛; 李春梅

来源：中国免疫学杂志, 2021, 1-14.

• 电离辐射
• 水蛭提取物
• 肺泡上皮细胞
• 上皮间质转化
• TGF-β/Smad通路

目的：探讨水蛭提取物对电离辐射诱导的肺泡上皮L2细胞上皮间质转化（EMT）的影响及其机制。方法：采用噻唑蓝（MTT）法检测水蛭提取物对L2细胞活力的影响以筛选合适的作用浓度。将体外培养的L2细胞分为正常对照组、8 Gy(60Coγ射线照射剂量)组和8 Gy+0.50 g/L水蛭提取物组和8 Gy+1.00 g/L水蛭提取物组，倒置显微镜观察L2细胞形态变化，免疫荧光法检测L2细胞中E-钙粘附蛋白（E-cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达，实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测E-cadherin、α-SMA、转化生长因子-β（TGF-β）、Smad2、Smad3 mRNA及相应蛋白表达水平，Transwell细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力。结果：与0 g/L相比，2.00和4.00 g/L水蛭提取物作用48 h后L2细胞活力明显降低（P<0.05），0.125、0.25、0.50和1.00 g/L水蛭提取物对L2细胞活力无明显毒性作用（P>0.05），设定0.50和1.00 g/L水蛭提取物进行后续实验。8 Gy照射后L2细胞由原有的鹅卵形变为长梭形，而给予0.50和1.00 g/L水蛭提取物后8 Gy照射所引起的细胞上述形态变化逐渐恢复。与正常对照组比较，8 Gy照射后L2细胞E-cadherin荧光强度减弱，而α-SMA荧光强度增强；与8 Gy组比较，0.50和1.00 g/L水蛭提取物作用后L2细胞中E-cadherin荧光强度增强，而α-SMA荧光强度减弱。与正常对照组比较，8 Gy照射后L2细胞E-cadherin mRNA和蛋白表达水平明显降低，而α-SMA、TGF-β、Smad2、Smad3 mRNA及相应蛋白表达水平明显升高（P<0.05）；0.50和1.00g/L水蛭提取物可明显逆转8 Gy照射所引起的上述变化（P<0.05）。与正常对照组比较，8 Gy照射后L2细胞迁移数和划痕愈合率明显升高（P<0.05）；与8 Gy组比较，0.50和1.00 g/L水蛭提取物作用后L2细胞迁移数和划痕愈合率明显降低（P<0.05）。结论：水蛭提取物可抑制电离辐射诱导的肺泡上皮L2细胞EMT，其作用机制可能与抑制TGF-β/Smad通路活化有关。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院