摘要
目的:探讨水蛭提取物对电离辐射诱导的肺泡上皮L2细胞上皮间质转化(EMT)的影响及其机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测水蛭提取物对L2细胞活力的影响以筛选合适的作用浓度。将体外培养的L2细胞分为正常对照组、8 Gy(60Coγ射线照射剂量)组和8 Gy+0.50 g/L水蛭提取物组和8 Gy+1.00 g/L水蛭提取物组,倒置显微镜观察L2细胞形态变化,免疫荧光法检测L2细胞中E-钙粘附蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测E-cadherin、α-SMA、转化生长因子-β(TGF-β)、Smad2、Smad3 mRNA及相应蛋白表达水平,Transwell细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力。结果:与0 g/L相比,2.00和4.00 g/L水蛭提取物作用48 h后L2细胞活力明显降低(P<0.05),0.125、0.25、0.50和1.00 g/L水蛭提取物对L2细胞活力无明显毒性作用(P>0.05),设定0.50和1.00 g/L水蛭提取物进行后续实验。8 Gy照射后L2细胞由原有的鹅卵形变为长梭形,而给予0.50和1.00 g/L水蛭提取物后8 Gy照射所引起的细胞上述形态变化逐渐恢复。与正常对照组比较,8 Gy照射后L2细胞E-cadherin荧光强度减弱,而α-SMA荧光强度增强;与8 Gy组比较,0.50和1.00 g/L水蛭提取物作用后L2细胞中E-cadherin荧光强度增强,而α-SMA荧光强度减弱。与正常对照组比较,8 Gy照射后L2细胞E-cadherin mRNA和蛋白表达水平明显降低,而α-SMA、TGF-β、Smad2、Smad3 mRNA及相应蛋白表达水平明显升高(P<0.05);0.50和1.00g/L水蛭提取物可明显逆转8 Gy照射所引起的上述变化(P<0.05)。与正常对照组比较,8 Gy照射后L2细胞迁移数和划痕愈合率明显升高(P<0.05);与8 Gy组比较,0.50和1.00 g/L水蛭提取物作用后L2细胞迁移数和划痕愈合率明显降低(P<0.05)。结论:水蛭提取物可抑制电离辐射诱导的肺泡上皮L2细胞EMT,其作用机制可能与抑制TGF-β/Smad通路活化有关。
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单位重庆医科大学附属第一医院