亚精胺对脂多糖诱导损伤的人脐静脉内皮细胞自噬的影响及机制

作者：谌赟; 石沁祎; 蔡毅; 戴婷; 刘敏^*

来源：中国药理学与毒理学杂志, 2022, 36(07): 481-487.

• 亚精胺
• 人脐静脉血管内皮细胞
• 自噬
• AMPK-mTOR信号通路

目的 探讨亚精胺(SPD)对血管内皮细胞损伤后自噬的影响及机制。方法 (1) SPD 50,100 和200 μmol·L-1预处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC)3 h，加脂多糖(LPS)1 mg·L-1孵育 24 h,CCK-8 检测细胞存活率。(2) HUVEC 细胞分成 7 组，细胞对照组、模型组、模型+SPD(100 μmol·L-1预处理 3 h)组、模型+腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)抑制剂多索霉素(Dor,10 μmol·L-1预处理 1 h)组、模型+SPD+Dor 组、模型+AMPK激活剂阿卡地新(Aicar,0.5 mmol·L-1预处理1.5 h)组和模型+SPD+Aicar组，药物预处理结束，模型组和用药组加 LPS 1 mg·L-1共孵育 24 h。流式细胞术检测细胞凋亡，免疫荧光和 Western印迹法检测微管相关蛋白 1 轻链 3-Ⅰ(LC3-Ⅰ)、LC3-Ⅱ和 P62 蛋白表达水平，Western 印迹法检测细胞 AMPK/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白AMPK、mTOR、P70核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)和真核细胞翻译起始因子 4E 结合蛋白 1(4EBP1)的磷酸化水平。结果 (1) 与细胞对照组相比，模型组细胞存活率显著降低(P<0.01)；与模型组相比，不同浓度 SPD 干预后细胞存活率均显著升高(P<0.01)。(2) 与细胞对照组相比，模型组细胞凋亡率、LC3-Ⅰ和 P62 蛋白表达水平及 mTOR,P70S6K 和 4EBP1 蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.05),LC3-Ⅱ蛋白表达水平和 AMPK蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05)；与模型组相比，SPD和 Aicar干预后细胞凋亡率、LC3-Ⅰ和 P62 蛋白表达水平及 mTOR,P70S6K 和 4EBP1 蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05),LC3-Ⅱ蛋白表达水平和 AMPK 蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.05)，而 Dor 干预后的趋势相反；与 Dor和 Aicar单独干预相比，联合 SPD后，细胞凋亡率、LC3-Ⅰ和 P62蛋白表达水平及 mTOR,P70S6K和4EBP1 蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05),LC3-Ⅱ蛋白表达水平和 AMPK 蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.05)。结论 SPD可通过激活AMPK/mTOR信号通路促进内皮细胞自噬，改善血管内皮细胞损伤。

• 单位
  阳新县人民医院; 武汉市第六医院