秦川牛成纤维细胞的分离培养体系优化

作者：冯贤辀; 陈辉; 贾永宏; 刘松奇; 温飞; 郭松茂; 韩帅琪; 胡建宏^*

来源：生物学杂志, 2023, 1-6.

• 秦川牛
• 皮肤组织
• 成纤维细胞
• 组织块培养法
• 酶消化法

为建立秦川牛体细胞分离培养体系,分别选用组织块培养法、胰酶-胶原酶消化法和胶原酶-胰酶消化法提取秦川牛耳缘成纤维细胞。结果表明:组织块培养法获取成纤维细胞所需周期长,组织块贴壁17 d后可获得原代成纤维细胞,而双酶消化法在原代细胞贴壁至9 d时便可进行传代纯化培养;与双酶消化法II相比,双酶消化法I获得的原代成纤维细胞浓度1.24×106 mL-1显著高于双酶消化法II(0.9×106 mL-1)(P<0.05);传代培养5 d后,细胞汇合度达到80%,取第三代成纤维细胞进行免疫荧光和流式细胞术鉴定,表明成纤维细胞纯度达到95%以上;纯化后的成纤维细胞培养至第3天,开始进入对数生长期,第8天时增殖速度下降进入平台期。因此,双酶消化法I(0.25%胰酶处理30 min,再用1%胶原酶处理60 min)为分离培养秦川牛耳缘成纤维细胞的最佳方法。

• 单位
  动物科技学院; 西北农林科技大学; 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所