H1N1亚型猪流感病毒的拯救

作者：彭亚平; 周红波; 李春; 金梅林

来源：生物工程学报, 2008, (05): 857-861.

DOI：10.13345/j.cjb.2008.05.020

• 猪流感病毒
• 双向表达载体
• 拯救
• 共转染 swine influenza virus (SIV)
• bidirection expression vector
• rescue
• cotransfection

利用8质粒拯救系统成功拯救出了猪流感病毒毒株A/Swine/TianJin/01/2004(H1N1)(A/S/TJ/04)。将猪流感病毒8个基因节段经RT-PCR合成cDNA后,分别克隆到RNA聚合酶I/II双向表达载体PHW2000中,构建成8个重组质粒。用8个重组质粒共转染COS-1细胞,30h后加入TPCK-胰酶至终浓度0.5μg/mL。共转染48小时后收获COS-1细胞及其上清,经尿囊腔接种9日龄SPF鸡胚。收获死亡鸡胚尿囊液并继续用SPF鸡胚传3代,得到有感染性的病毒。经血凝、血凝抑制验、测序分析、电镜观察等均证实了A/S/TJ/04猪流感病毒的成功拯救。这是目前国内首次报道拯救出...

• 单位
  农业微生物学国家重点实验室