抗口蹄疫病毒单链抗体cDNA T7噬菌体展示文库的构建

作者：张晓霞; 马军武; 周广青; 代鹏; 林密; 冯霞

来源：中国兽医科学, 2013, (03): 247-251.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2013.03.002

• 口蹄疫
• 单链抗体
• T7噬菌体展示 foot-and-mouth disease
• scFv
• T7 phage display

为构建抗口蹄疫病毒单链抗体cDNA T7噬菌体展示文库,利用Trizol试剂提取BALB/c鼠脾B淋巴细胞RNA,采用RT-PCR两步法扩增BALB/c鼠重链可变区和轻链可变区基因,用重叠延伸PCR技术构建抗口蹄疫病毒scFv基因库;在scFv cDNA双链末端加上EcoRⅠ/HindⅢ接头,用内切酶EcoRⅠ和HindⅢ消化接头,形成的双链cDNA两端分别带有EcoRⅠ和HindⅢ黏性末端;将其与含EcoRⅠ和HindⅢ末端的T7Select 10-3b载体连接,经体外包装,BLT5403菌株增殖,文库扩增,进行体外亲和筛选。所构建的文库库容量的原始浓度为1×107 PFU/mL,扩增后文库...

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室