hKDR+/+人源化及Rag1-/-基因缺陷新型双靶点遗传修饰荷瘤小鼠模型的建立

作者：刘甦苏; 吴勇; 曹愿; 赵皓阳; 翟世杰; 孙晓炜; 李琳丽; 范昌发^*

来源：实验动物与比较医学, 2023, 43(02): 103-111.

• +/+人源化小鼠" name="keyword">hKDR+/+人源化小鼠
• -/-基因敲除小鼠" name="keyword">Rag1-/-基因敲除小鼠
• VEGFR靶点
• 抗体
• 肿瘤

目的 通过增强血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)人源化小鼠(hKDR+/+)接纳不同来源的小鼠肿瘤细胞系的潜力，建立能支持多种肿瘤细胞系成瘤的、可评价针对VEGFR靶点药物的新型荷瘤小鼠模型。方法 首先建立基于hKDR+/+人源化小鼠模型评价针对VEGFR靶点抗体体内活性的方法，同时采用CRISPR/Cas9技术构建重组激活基因1 (recombination activating gene 1,Rag1)敲除的C57BL/6N小鼠(命名为Rag1-/-小鼠)。然后将Rag1-/-小鼠与hKDR+/+小鼠交配，筛选获得双基因纯合、双靶点基因修饰的hKDR+/+/Rag1-/-小鼠。最后在hKDR+/+、Rag1-/-、hKDR+/+/Rag1-/-和C57BL/6N小鼠上测试不同小鼠品系来源肿瘤细胞系的体内肿瘤生长差异。结果 针对VEGFR靶点设计的抗体在hKDR+/+小鼠体内表现出明显的抗肿瘤活性，与PBS组相比，肿瘤体积明显减小(P<0.01)，肿瘤质量明显减轻(P<0.05)。Rag1-/-小鼠、hKDR+/+/Rag1-/-小鼠的外周血B细胞和T细胞数量均明显减少(P<0.05,P<0.001)。C57BL/6小鼠来源的MC38细胞接种7 d后，在hKDR+/+/Rag1-/-、Rag1-/-、C57BL/6N和hKDR+/+四组小鼠体内均可见肿瘤生长。BALB/c小鼠来源的CT26细胞接种10 d后，仅在hKDR+/+/Rag1-/-和Rag1-/-小鼠体内见到肿瘤生长，在C57BL/6N及hKDR+/+小鼠中均未见肿瘤生长；接种后3周，hKDR+/+/Rag1-/-小鼠的成瘤体积明显大于Rag1-/-小鼠(P<0.01)。结论 获得了Rag1基因敲除小鼠，并进一步筛选获得新型hKDR+/+/Rag1-/-双靶点基因修饰小鼠模型；Rag1基因缺失时，不同品系小鼠来源的肿瘤细胞系更易成瘤。这提示可以通过降低hKDR+/+人源化小鼠的免疫反应能力，增强或扩大该模型小鼠接纳肿瘤细胞系的范围，构建多种可用于评价VEGFR靶点药物的荷瘤小鼠模型。

• 单位
  中国食品药品检定研究院