赤芝FPS基因酵母单杂交文库构建及其上游转录因子的筛选

作者：徐晓兰; 赖荣才; 陈体强; 石林春; 陈士林^*

来源：中草药, 2020, 51(14): 3770-3776.

DOI：10.7501/j.issn.0253-2670.2020.14.022

• 赤芝
• 法尼基焦磷酸合酶
• 酵母单杂交
• 转录因子
• 灵芝三萜

目的筛选赤芝三萜合成途径中法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)基因的上游调控转录因子。方法首先克隆了FPS基因启动子,并连接至pAbAi质粒构建诱饵载体pAbAi-FPS。将pAbAi-FPS转化Y1H酵母感受态细胞构建诱饵菌。采用SMART技术构建赤芝酵母单杂交cDNA文库,再将纯化的双链cDNA、pGADT7-Rec共转化诱饵菌株,筛选FPS上游的转录调控因子。结果构建了含pAbAi-FPS的诱饵载体并筛选出诱饵菌株,构建了cDNA文库并转化诱饵菌株,筛选出阳性克隆37个,得到作用FPS基因上游的转录调控因子18个,包括转录因子3个、核糖体蛋白5个及其他家族蛋白10个。结论筛选出转录因子GlSNF2、GlMHR和GlZn2Cys6为调控FPS表达的候选基因,为深入研究FPS基因的表达调控机制奠定了研究基础。

• 单位
  中国中医科学院中药研究所; 福建省农业科学院; 福建农林大学; 中国医学科学院药用植物研究所