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摘要
本研究旨在克隆奶牛脑肌类芳香烃受体核转位蛋白1基因（Brain and Muscle Arnt-Like Protein 1,BMAL1）的蛋白编码序列（Coding Sequence,CDS）并构建其真核表达载体，运用生物信息学方法解析其CDS序列和编码蛋白特性。以牛肝脏组织为材料，利用PCR技术扩增奶牛BMAL1基因中带有同源臂的CDS片段。采用同源重组法，将目的片段连接至酶切线性化的pc DNA3.1-Puro-N-3HA真核表达载体上，酶切及测序结果均符合预期的质粒命名为pc DNA3.1-3HA-c BMAL1。将空载与重组质粒分别转染至HEK293T细胞，通过实时荧光定量PCR技术（q PCR）和Western Blotting技术检验奶牛BMAL1基因的过表达效果，并利用生物信息学软件分析BMAL1基因CDS区及其编码蛋白的特性和功能。结果显示，pc DNA3.1-3HA-c BMAL1真核表达载体构建成功，将该质粒转染至HEK293T细胞后，成功实现了BMAL1在m RNA和蛋白水平的过表达；牛BAML1基因与绵羊、山羊同源性最高，BMAL1蛋白为不稳定蛋白，其上不存在信号肽以及跨膜结构，共包含72个磷酸化位点，其二级结构以无规则卷曲和α-螺旋为主，参与生物钟基因节律性表达调控等过程。本研究构建了奶牛BMAL1基因的真核表达载体，在HEK293T细胞中成功过表达，并进行了系统的生物信息学分析，为进一步探究奶牛BMAL1基因的功能和奶牛生物钟系统的分子调控机制奠定基础。
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