采用荧光定量RT-PCR法检测超极化激活环核苷酸门控阳离子通道

作者：黄维清; 孔庆暖; 张亚青; 张七一

来源：心脏杂志, 2009, (04): 457-461.

• 聚合酶链反应
• 荧光定量
• HCN基因
• 心脏 polymerase chain reaction
• fluorogenic quantitative
• hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channel gene
• heart

目的建立用SYBR Green荧光染料检测超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(HCN4)的实时定量RT-PCR方法。方法提取窦房结细胞的总RNA,反转录成cDNA后,应用RT-PCR法检测HCN4的表达,通过琼脂糖凝胶回收PCR产物并构建重组质粒,用梯度稀释的质粒模板建立荧光定量RT-PCR法检测HCN4的标准曲线,并检测心脏组织中HCN4的表达水平。结果成功构建了质粒重组子,并建立用SYBR Green荧光染料在RNA水平检测HCN4通道的标准曲线,相关系数为0.997重复6次实验组内和组间变异系数均<1.0%。心脏组织中窦房结HCN4表达量最高,心室表达量最低。结论基于SYBR Green荧...

• 单位
  第四军医大学; 青岛市市立医院; 西京医院