植物乳杆菌P-8羟基脂肪酸脱氢酶的克隆表达及活性鉴定

作者：赵彤彤; 赵微; **; 赵国芬^*; 刘扬; 张和平; 包秋华

来源：食品与发酵工业, 2019, 45(01): 36-40.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.018180

• 植物乳杆菌P-8
• 羟基脂肪酸脱氢酶
• 生物信息学
• 共轭亚油酸
• 重组表达

以植物乳杆菌P-8的基因组DNA为模板扩增出其羟基脂肪酸脱氢酶基因,对其进行生物信息学分析,结果表明该基因共编码286个氨基酸,蛋白质理论分子质量约为32 k Da,理论等电点为5. 15,不含跨膜区,是1个亲水性的细胞质蛋白。Ser、Thr、Tyr磷酸化位点个数分别为3、3、7。蛋白质的二级结构主要构成方式为α螺旋、无规则卷曲和β折叠。将此基因连接到p ET-28a(+)质粒载体中构建重组质粒p ET28a-DH,并转化入大肠杆菌E. coli Transetta (DE3)中获得重组大肠杆菌。重组菌在16℃条件下,经0. 1 mmol/L IPTG诱导16 h有可溶性表达,经Western Blot验证确定为重组羟基脂肪酸脱氢酶。通过镍柱亲和层析,得到纯化的重组酶。重组酶经初步活性检测,结果显示重组酶可以转化10-羟基-顺-12-十八碳烯酸为10-氧代-顺-12-十八碳烯酸,本研究为进一步探明植物乳杆菌P-8转化共轭亚油酸的机制奠定了基础。

• 单位
  内蒙古农业大学; 生命科学学院