桂枝茯苓丸对PCOS模型小鼠卵巢颗粒细胞自噬的影响

作者：胡小丹; 朱鸿秋^*; 朱影; 刘敏; 陈海燕

来源：中国实验方剂学杂志, 2021, 27(15): 1-7.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20211598

• 桂枝茯苓丸
• 颗粒细胞
• 自噬
• 多囊卵巢综合征(PCOS)

目的:探讨桂枝茯苓丸对多囊卵巢综合征(PCOS)模型小鼠颗粒细胞自噬的影响。方法:20只SD小鼠中随机选取10只建立PCOS小鼠模型,并提取小鼠卵巢颗粒细胞进行体外培养。设置正常小鼠颗粒细胞为空白组,PCOS小鼠颗粒细胞为模型组,模型组颗粒细胞分别给予10%体积的17.6,35.1,70.2 mg·kg-1桂枝茯苓丸含药血清,10%体积的25 mg·kg-1二甲双胍含药血清作为培养基培养颗粒细胞,空白组颗粒细胞用10%体积的空白血清培养72 h。造模期间,测量小鼠体质量变化;造模结束后用显微镜观察小鼠卵巢形态,检测空腹血糖;使用放射免疫法检测空腹胰岛素水平和睾酮水平;细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)检测卵巢颗粒细胞增殖情况,找到对于细胞活力无明显影响的最高含药血清剂量,用于后续实验;流式细胞仪检测颗粒细胞自噬情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内微管相关蛋白1轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ),LC3Ⅱ,Beclin1,p62蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠体质量增加、空腹胰岛素及空腹血糖水平增加、睾酮水平增加(P<0.05,P<0.01),表明PCOS小鼠建模成功。与空白组比较,经10%桂枝茯苓丸含药血清培养基孵育后,各组细胞自噬率均有所下降(P<0.05);Western blot检测结果表明,与空白组比较,模型组中Beclin1,LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平明显升高,p62的蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,桂枝茯苓丸中、高剂量组中Beclin1,LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平明显下降,p62水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:桂枝茯苓丸可以通过下调Beclin1,LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达,抑制卵巢颗粒细胞的自噬水平。

• 单位
  成都中医药大学