苏云金芽胞杆菌Sigma K在大肠杆菌中的表达与纯化

作者：杨敏; 彭琦; 黄闽忠; 考桂伟; 张杰; 宋福平

来源：微生物学通报, 2016, 43(01): 69-75.

DOI：10.13344/j.microbiol.china.150191

• 苏云金芽胞杆菌
• Sigma K蛋白
• 生物活性
• 转录调控

【目的】在大肠杆菌中表达纯化苏云金芽胞杆菌HD73的转录调控因子Sigma K(σK)。【方法】PCR扩增出苏云金芽胞杆菌HD73中sig K基因的ORF(Open reading frame)装载到带有His标签的表达载体p ET21b上,转入到表达菌株BL21(DE3)中获得重组菌株BL21(p ETsig K),通过SDS-PAGE、镍柱亲和纯化、阴离子交换纯化和凝胶迁移实验(EMSA)等方法对Sigma K蛋白进行提取、纯化和生物活性分析。【结果】正确表达出大小约为27 k D的His-Sigma K蛋白,并获得了纯化的蛋白。EMSA结果表明纯化的His-Sigma K蛋白可以与受其控制的cry1Ac基因启动子结合。【结论】表达和纯化了His-Sigma K蛋白,His-Sigma K具有与受其控制的启动子结合的功能。

• 单位
  生命科学学院; 中国农业科学院植物保护研究所; 东北农业大学; 植物病虫害生物学国家重点实验室