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摘要
【目的】对山羊干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15)的CDS区进行克隆、表达和生物信息学分析，并探讨小反刍兽疫病毒（Peste des petits ruminants virus,PPRV）感染山羊子宫内膜上皮细胞（caprine endometrial epithelial cells,EEC）对ISG15的影响。【方法】根据GenBank中公布的山羊ISG15基因预测序列（登录号：XM＿005690795）设计特异性引物，利用RT-PCR方法扩增山羊ISG15基因CDS区，连接至真核表达载体进行测序并表达，对不同物种ISG15核苷酸及氨基酸序列进行比对，并构建系统进化树，利用生物信息学方法对ISG15蛋白理化性质、跨膜结构、修饰位点、二级结构、三级结构、亚细胞定位等进行分析。通过构建真核表达载体转染及PPRV感染EEC细胞，利用间接免疫荧光的方法观察其外源性和内源性亚细胞定位，并探究PPRV感染对EEC细胞的影响。【结果】成功克隆出山羊ISG15基因CDS区并进行了真核表达。山羊ISG15核苷酸和氨基酸相似性及进化树分析都与盘羊和绵羊亲缘关系最近。生物信息学分析结果显示，山羊ISG15基因位于16号染色体上，全长474bp，编码157个氨基酸，分子质量约为17.47ku，为亲水性蛋白，无跨膜区和信号肽，有1个潜在的N-糖基化位点，16个潜在的O-糖基化位点和10个潜在的磷酸化位点。二级结构与三级结构预测显示，山羊ISG15蛋白由无规则卷曲、延伸链、α-螺旋和β-转角组成，比例分别为34.39%、31.21%、21.66%和12.74%。可以与干扰素和泛素化相关的蛋白相互作用，并参与机体的抗感染作用。亚细胞定位显示，外源性和内源性ISG15均定位于细胞质中。【结论】试验成功克隆出山羊ISG15基因CDS区序列，亚细胞定位发现内源性和外源性ISG15均定位于EEC细胞的细胞质中。结果为后续ISG15基因细胞内功能研究奠定基础。
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