摘要
目的:炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)严重威胁人体健康,合理饮食可预防IBD的发生。食性植物来源胞外囊泡结构与功能和外泌体类似,且具有维持肠道稳态的功能而备受关注。本文旨在解析大蒜胞外囊泡(garlic-derived extracellular nanovesicles, GENs)的活性成分并探究其对小鼠结肠炎的作用。方法:采用超速离心与蔗糖密度梯度离心法从蒜汁中分离纯化GENs,并对其形貌和结构进行表征。采用液相色谱与质谱联用对GENs进行脂质分析和蛋白质组学分析;采用RNA转录组测序技术进行miRNA序列鉴定和靶基因预测分析。构建Caco-2单层肠上皮细胞模型,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激后,通过荧光光谱测定细胞渗透表观系数;采用试剂盒法测定上清液中一氧化氮(nitric oxide,NO)含量;采用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)测定细胞上清液中白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、干扰素(interferon-γ,IFN-γ)和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量。C57BL/6J 小鼠口服给予GENs(20、100、500 mg/kg),评估GENs的毒性,考察GENs对3%葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium salt,DSS)诱导结肠炎小鼠的疾病活动指数(disease activity index,DAI)和结肠长度的影响;采用苏木精和伊红对结肠组织切片进行染色;采用ELISA和试剂盒法测定血清中IL-6、IFN-γ、TNF-α和NO的水平。结果:GENs为纳米级杯状囊泡,含有26种脂质、62种蛋白质和 317种小RNA(microRNA, miRNA),脂质中磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)含量最高,预测出5种miRNAs可靶向编码人炎性细胞因子的基因。GENs能显著降低LPS引起Caco-2单层细胞的通透性损伤,抑制NO的产生,调节细胞因子IL-6、IFN-γ、TNF-α和IL-1β分泌水平。体内实验表明,GENs 无毒性;当GENs剂量为100 mg/kg时能显著降低小鼠DAI分值,改善...
-
单位食品科学与工程学院; 南京财经大学