长链非编码RNA LOC101927476抑制卵巢癌细胞侵袭迁移和增殖

作者：赵鹏飞; 南亚兵; 王亚婷; 李斌; 刘芝华^*

来源：中华肿瘤杂志, 2022, 44(01): 104-111.

DOI：10.3760/cma.j.cn112152-20200212-00084

• 卵巢肿瘤
• 长链非编码RNA
• 侵袭
• 迁移
• 增殖

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)LOC101927476在卵巢癌细胞中的表达及其对卵巢癌生物学特征的影响。方法选取2018—2019年于中国医学科学院肿瘤医院手术治疗的卵巢癌患者。采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测卵巢癌细胞系3AO、OVCA429、TOV21G、A2780、SKOV3以及22例卵巢癌原发瘤和转移瘤组织中LncRNA LOC101927476的表达水平, 采用TCGA数据库中卵巢癌转录组测序数据验证LncRNA LOC101927476和GATA4的表达, 采用慢病毒包装体系构建过表达LOC101927476(OE-LOC101927476组)和空载(OE-EV组)慢病毒并转染至3AO细胞。设计单链向导RNA(sgRNA), 利用CRISPR/Cas9构建LncRNA LOC101927476敲除细胞系。采用Transwell法和划痕实验检测LncRNA LOC101927476对卵巢癌细胞侵袭和转移能力的影响。采用细胞计数盒8(CCK-8)法检测细胞的增殖能力。结果 real-time PCR显示, 22例卵巢癌患者中, 20例转移灶中LncRNA LOC101927476的表达水平低于原发灶。Transwell迁移实验显示, OE-EV组3AO细胞的穿膜细胞数为(1 024±76)个, 高于OE-LOC101927476组[(699±65)个, P=0.003];sg-Control组OVCA429细胞的穿膜细胞数为(363±27)个, 低于sg-LOC101927476组[(472±40)个] , 差异有统计学意义(P=0.011)。Transwell侵袭实验显示, OE-EV组3AO细胞的穿膜细胞数为(661±95)个, 高于OE-LOC101927476组[(357±63)个], 差异有统计学意义(P=0.006);sg-Control组OVCA429细胞的穿膜细胞数为(309±13)个, 低于sg-LOC101927476组[(512±72)个] , 差异有统计学意义(P=0.005)。划痕实验显示, 培养48 h时, OE-LOC101927476组3AO细胞的划痕愈合比例为(10.86±0.63)%, 低于OE-EV组[(57.38±4.42)%], 差异有统计学意义(P=0.009);培养24 h时, sg-LOC101927476组OVCA429细胞的划痕愈合比例为(59.98±1.34)%, 高于sg-Control组[(23.15±2.03)%], 差异有统计学意义(P=0.004)。CCK-8结果显示, OE-LOC101927476组3AO细胞的增殖能力明显减弱, 在过表达LncRNA LOC101927476后第4天时, OE-LOC101927476组3AO细胞的吸光度(A)值为2.07±0.08, 与OE-EV组(2.29±0.04)比较, 差异有统计学意义(P=0.009)。sg-LOC101927476组OVCA429细胞的增殖能力提高, 在敲降LncRNA LOC101927476的表达后第4天时, sg-LOC101927476组OVCA429细胞的A值为(2.13±0.03), 与sg-Control组(1.93±0.03)比较, 差异有统计学意义(P=0.001)。OE-LOC101927476组3AO细胞中GATA4的相对表达水平为1.86±0.25, 与OE-EV组(1.00±0.00)比较, 差异有统计学意义(P=0.001)。在LncRNA LOC101927476高表达的患者中, GATA4的表达水平为(2.93±0.35), 高于LncRNA LOC101927476低表达的患者(0.29±0.06), 差异有统计学意义(P=0.001)。结论 LncRNA LOC101927476能够抑制卵巢癌的侵袭、迁移和增殖。

• 单位
  分子肿瘤学国家重点实验室; 中国医学科学院北京协和医学院