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摘要
目的原核表达、纯化肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)Tpx蛋白并测定其活性。方法利用生物信息学方法分析Tpx蛋白的生物学特性。设计特异性引物,PCR扩增Tpx基因并对进行双酶切,酶切片段连接到表达质粒pET28a。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),利用IPTG诱导重组Tpx蛋白表达,使用Ni 2+亲和层析进行纯化,采用氧化铁二甲酚橙法(FOX)测定其活性。结果生物信息学分析Tpx蛋白无信号肽,无跨膜结构域。α-螺旋、延伸主链、β-转角和无规卷曲的含量分别为30%、27.6%、11.6和30.7%。晶体结构在蛋白结构数据库(PDB)中的登陆号为1psq.1.A。PCR扩增Tpx基因片段大小为492bp,连接到pET28a后获得重组质粒pET28a-Tpx。重组质粒转化DE3后经IPTG诱导表达分子质量单位约为22ku的重组蛋白,经亲和层析得到高纯度的重组Tpx蛋白,该蛋白能分解H2O2和叔丁基过氧化氢(t-BHP)。结论成功构建pET28a-Tpx质粒,表达的重组Tpx蛋白具有氧化酶活性,为研究肺炎链球菌的抗氧化机制奠定了实验基础。
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