TAB182维持RPA2 mRNA稳定性促进DNA同源重组修复的研究

作者：李刚; 赖淑婷; 韩阳; 白琛俊; 关华; 高山山^*; 周平坤

来源：中华放射医学与防护杂志, 2022, 42(04): 241-247.

• TAB182
• RPA2
• DNA双链断裂
• 同源重组修复
• 放射敏感性

目的探讨TAB182促进同源重组(HR)修复的相关调控分子及机制。方法利用shRNA敲低人乳腺癌MCF-7细胞中的TAB182基因, TAB182敲低的MCF-7细胞为沉默组, 使用shRNA阴性对照物的MCF-7细胞为TAB182阴性对照组。通过RNA测序分析, 筛选与TAB182相关差异表达的HR修复基因。qRT-PCR验证相关基因的mRNA表达, Western blot验证相关蛋白的表达。RAD51和BrdU免疫荧光检测DNA断裂末端形成的3′单链DNA(ssDNA);流式细胞术检测细胞周期阻滞和细胞凋亡;集落形成实验检测细胞的放射敏感性。结果 RNA测序分析和qRT-PCR验证结果一致, TAB182沉默组细胞中RPA2的mRNA表达降低(t=17.97, P<0.05)。相比于TAB182阴性对照组细胞, TAB182沉默组细胞RPA2在蛋白水平也显著减少。相比于TAB182阴性对照组, TAB182沉默组细胞中RAD51焦点(foci)的表达显著降低;3′ ssDNA结合蛋白标志物BrdU在TAB182沉默组细胞的细胞核中foci形成显著减少。在放射菌素D作用后的第4、8、12 h, 相比于TAB182阴性对照组, TAB182沉默组细胞RPA2 mRNA的衰减加快(t=5.37、3.79、3.69, P<0.05)。相比于TAB182阴性对照组, TAB182沉默组细胞放射敏感性增加(t=3.48, P<0.05);且TAB182沉默组放射诱发的凋亡率显著增加(t=11.05, P<0.05)、照射后24 h的周期阻滞时间延长(t=8.40, P<0.01)。结论 TAB182通过维持RPA2 mRNA的稳定性, 促进RPA2的表达, 在DSBs的同源重组修复通路中发挥作用。TAB182的缺失可增强肿瘤细胞的放射敏感性。

• 单位
  公共卫生学院; 南华大学