科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的观察微小RNA-613(miR-613)对人肾细胞癌细胞生物学行为的影响,并探究其分子机制。方法分别将合成的miR-613模拟物(mimics)和miR-NC通过Lipofectamine 3000转入786-O细胞中,分为观察组和对照组。实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测2组细胞中miR-613的表达量验证转染是否成功。噻唑蓝(MTT)法检测786-O细胞增殖,Transwell细胞迁移实验检测786-O细胞迁移。生物信息学预测miR-613的靶基因。双荧光素酶报告实验验证miR-613与靶基因之间的靶向关系及结合位点。qPCR和免疫印迹法(Western blot)检测靶基因的表达水平。结果 qPCR检测结果显示观察组中miR-613的表达量(16.22±1.08)显著高于对照组(1.06±0.20),差异有统计学意义(P<0.01)。MTT结果显示观察组细胞在转染后的4、5 d时间点均表现出吸光度值降低(P<0.05)。Transwell细胞迁移实验结果显示,对照组和观察组细胞从Transwell上室迁移到下室的细胞数分别为(199.10±22.74)个和(95.55±17.88)个,差异有统计学意义(P<0.05)。生物信息学预测miR-613的靶基因为皮层肌动蛋白(CTTN)。双荧光素酶报告实验验证miR-613能够靶向调控CTTN基因(P<0.05)。转染后观察组细胞中CTTN mRNA及蛋白的表达量显著低于对照组(P<0.01)。结论上调miR-613的表达可抑制肾细胞癌细胞的增殖和迁移能力,其可能的分子机制是miR-613靶向抑制CTTN基因的表达。
-
单位中国人民解放军陆军军医大学; 重庆市永川区人民医院; 第三军医大学
