鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒二重PCR检测方法的建立

作者：李丹; 谢芝勋^*; 李孟; 罗思思; 谢丽基; 张民秀; 黄娇玲; 范晴; 王盛; 谢志勤; 邓显文; 曾婷婷; 张艳芳

来源：安徽农业科学, 2020, 48(09): 113-116.

DOI：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.09.031

• 鸡细小病毒
• H9亚型禽流感病毒
• 二重PCR

[目的]建立一种能够同时诊断鸡细小病毒(chincken parvovirus,ChPV)和H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的检测方法。[方法]根据GenBank中已发表的ChPV NS基因、H9亚型AIV HA基因的保守序列,分别设计多对引物,并通过一系列不同组合对温度和反应体系的调整试验,最终筛选出2对最佳特异性引物组合,建立了ChPV和AIV二重PCR检测方法用于ChPV和H9亚型AIV的检测。[结果]特异性和敏感性的试验结果表明,建立的二重PCR方法特异性良好,可以在一管PCR反应同时检测ChPV和H9亚型AIV。针对ChPV NS基因和H9亚型AIV HA基因的扩增片段大小分别为558和367 bp,其他常见的禽病病原体均未见阳性反应;该法对ChPV和H9亚型AIV的检测下限均为5×104拷贝/μL质粒;临床样品检测结果表明,对140份临床样品检测结果与AIV分离测序及ChPV PCR阳性产物测序结果完全一致。[结论]建立的ChPV和H9亚型AIV二重PCR检测方法不仅特异性良好,而且检测的灵敏度高,对ChPV和H9亚型AIV的监测及有效防控具有重要意义。

• 单位
  广西壮族自治区兽医研究所