牛病毒性腹泻病毒E1蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

作者：康彪; 高闪电; 独军政; 田占成; 殷宏^*; 胡永浩^*

来源：动物医学进展, 2018, 39(11): 30-34.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2018.11.005

• 牛病毒性腹泻病毒
• E1蛋白
• 表达
• 多克隆抗体

利用原核表达系统表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的E1蛋白,以制备抗E1多克隆抗体。根据E1蛋白的编码序列,设计一对特异性引物,利用PCR扩增BVDV E1片段,定向插入pPROEX-HTb载体中,转化大肠埃希菌BL21感受态细胞,筛选获得阳性重组菌,以IPTG进行诱导表达、金属离子层析法纯化获得分子质量为23ku的重组E1蛋白。利用纯化的E1重组蛋白经3次免疫新西兰白兔后收获多克隆抗体,间接ELISA检测多克隆抗体效价达到1∶12 800以上。间接免疫荧光试验证实多克隆抗体可与细胞中的BVDV抗原发生反应,具有良好的反应性和特异性。成功制备了BVDV重组E1蛋白的兔源多克隆抗体,为BVDV的检测和E1蛋白功能的研究奠定了基础。

• 单位
  江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 甘肃农业大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室