全氟辛酸特异性单域重链抗体的制备

作者：张星; 王颖; 程亚庭; 冯艳; 王艳

来源：环境与职业医学, 2016, 32(08): 744-748.

• 全氟辛酸
• 完全抗原
• 重链抗体文库
• 间接竞争酶联免疫吸附试验

[目的]基于抗原抗体特异性结合的原理,制备一种针对全氟辛酸(PFOA)小分子的特异性抗体,以用于PFOA的现场快速检测。[方法]采用碳二亚胺法将PFOA与牛血清白蛋白(BSA)偶联,将此完全抗原作为包被抗原,用重链抗体噬菌体文库进行筛选获得阳性克隆,聚合酶链反应扩增重链抗体片段并与含有人抗体Fc段的质粒连接,采用原核表达系统进行抗体蛋白表达和纯化,间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)进行验证。[结果]成功合成完全抗原PFOA-BSA,偶联比为8。采用重链抗体库进行4轮筛选,获得7株阳性克隆,经进一步的原核表达系统进行蛋白表达和纯化,得到5种与预期大小相符的、含有人抗体Fc段的抗体蛋白。经间接竞争ELISA方法初步检测验证,获得1个可与PFOA特异结合的单域重链抗体。[结论]最终获得针对PFOA的特异性抗体,有望用于建立快速检测不同介质中PFOA的免疫学检测方法。

• 单位
  上海交通大学; 基础医学院; 公共卫生学院