基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠抗氧化应激的作用机制

作者：许皖; 李娜; 柳海艳; 修琳琳; 于雪; 陈绍红^*; 钟赣生^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2023, 29(01): 37-44.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20222140

• 葛花
• 枳椇子
• 急性酒精性肝损伤
• 抗氧化
• Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化响应元件ARE信号通路

目的：观察葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝病的改善作用，为临床用药提供科学依据，并为开展其他酒精性相关疾病的研究提供思路和借鉴。方法：采用一次性灌胃给予56%(V/V)红星二锅头酒(12 mL·kg-1)建立小鼠急性酒精性肝损伤模型，120只雄性ICR小鼠按体质量随机分成空白组、模型组、水飞蓟宾组、葛花组、枳椇子组、葛花-枳椇子1∶1组、葛花-枳椇子1∶2组、葛花-枳椇子2∶1组，每组15只。各给药组按10 mL·kg-1预防性灌胃相应药物3 d，除空白组外，其余各组小鼠按12 mL·kg-1分别灌胃给予二锅头酒，于酒后12 h处死小鼠，并观察药物对小鼠肝功能、抗氧化应激能力的影响；苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理变化；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化响应元件(ARE)信号通路相关蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测相关各指标mRNA表达。结果：与正常组比较，模型组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)水平，肝组织中丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)含量显著升高(P<0.01)；谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性显著降低(P<0.01),Keap1 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),Nrf2 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01)；与模型组比较，葛花-枳椇子2∶1组小鼠ALT、AST和ALP水平显著减低(P<0.01)，肝脏组织中MDA、ROS水平均显著减低(P<0.01),GSH、SOD水平均显著升高(P<0.01)；肝脏脂肪变损伤均减轻，显著上调Nrf2 mRNA及蛋白表达(P<0.01)，显著下调Keap1mRNA及蛋白表达(P<0.01)。结论：葛花、枳椇子及其配伍组合对小鼠急性酒精性肝损伤有一定的预防作用，其机制可能与调控肝脏内Keap1/Nrf2/ARE信号通路，恢复并上调由乙醇所破坏的肝脏氧化平衡有关，从而有效遏制酒精性肝病的发展。

• 单位
  宁波卫生职业技术学院; 北京中医药大学