枣ZjWRKY22基因克隆、亚细胞定位及表达载体构建

作者：张雪慧; 张鹏飞; 刘亚令; 梁晋军; 温鹏飞^*

来源：山西农业科学, 2023, 51(08): 839-845.

• 枣
• ZjWRKY22
• 基因克隆
• 生物信息学分析
• 亚细胞定位
• 超表达载体

WRKY是植物特有的锌指型转录调控因子，参与调控植物抗逆、生长发育和新陈代谢。为探索易裂品种壶瓶枣WRKY转录因子ZjWRKY22的生物学功能，同时为揭示枣WRKY响应非生物胁迫的分子机制提供理论基础，对克隆ZjWRKY22基因编码区序列进行生物信息学预测，并对枣吊、茎、叶、花、果实进行差异表达分析。结果表明，从壶瓶枣中克隆得到ZjWRKY22基因CDS序列长1 068 bp，共编码335个氨基酸，分子质量约为38.9 ku，等电点为5.92，分子式为C1682H2582N472O568S13；该蛋白中丝氨酸最多，占18%，为亲水不稳定蛋白质，无信号肽和跨膜结构域，含有76个磷酸化位点；二级结构类型以无规则卷曲为主，该基因具有典型的WRKY结构域，三级结构预测主要由4个β-折叠组成，分别为WRKYGQK、RGYYR、RKQVER、FIVTYT；属于WRKY家族Ⅱe组。同源序列比对显示，枣与杨梅、桃、扁桃、梅的同源性分别为75.86%、74.88%、74.41%和74.88%，系统进化树表明，枣ZjWRKY22与酸枣亲缘关系最近；实时荧光定量显示，ZjWRKY22在果实中表达量最高，具有组织特异性。进一步构建融合表达载体pCAMBIA1300-GFP-ZjWRKY22，通过农杆菌瞬时注射本氏烟草进行亚细胞定位，结果确定了ZjWRKY22蛋白位于细胞核中，同时成功构建了植物超表达载体pCAMBIA-1300-ZjWRKY22。

• 单位
  生命科学学院; 山西农业大学