摘要
目的 探讨微小RNA(miRNA)-375对胃癌细胞的功能研究,并讨论其可能的作用机制.方法 将miRNA-375的真核表达载体稳定转染入人胃癌细胞株HGC-27,筛选并建立高表达miRNA-375的胃癌细胞(PC3.1-375)组.另设空白质粒转染组(PC3.1组)和空白对照组.通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法和流式细胞检测法检测3组细胞的增殖能力和凋亡率.Western印迹法检测3组细胞中星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)蛋白表达.建立胃癌裸鼠皮下种植瘤模型,种植30 d后处死裸鼠取瘤测量.免疫组织化学法检测移植瘤组织内AEG-1的蛋白表达.统计学方法采用t检验和方差分析.结果 PC3.1 375组细胞的miRNA-375的表达量较空白对照组和PC3.1组明显上升(t=2.82、2.01,P均<0.05),同时增殖能力显著降低,实验第3天时差异最大(t3d=3.56、2.79,P均<0.05),凋亡率显著升高(t=2.05、2.96,P均<0.05).Western印迹结果示,AEG-1蛋白在PC3.1-375组中的表达较空白对照组和PC3.1组下降(t=3.78、2.26,P均<0.05).至实验终点时,空白对照组裸鼠皮下种植瘤的体积和质量分别为(3.12±0.77) cm3和(3.86±0.56)g,PC3.1组为(3.76±0.65) cm3和(4.01±0.52)g,均显著大于PC3.1 375组的(0.72±0.21) cm3和(0.85±0.15)g(体积:t=5.67、6.92,质量:t=4.56、5.01,P均<0.05).AEG-1蛋白在PC3.1-375组种植瘤中的表达较空白对照和PC3.1组明显下调(F=35.000,P<0.05).结论 miRNA-375可有效抑制胃癌细胞HGC-27的增殖,促进细胞凋亡,miRNA-375在胃癌中是一种抑瘤因子.AEG-1可能是miRNA-375作用的靶基因.
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单位苏州大学附属第一医院