牛病毒性腹泻病毒N^pro基因克隆、生物信息学分析及其表达鉴定

作者：王丽; 马骏; 吴陈华; 黄雯静; 高丽; 付金蕾; 赵童; 刘思雨; 岳山; 刘宇; 翟军军; 朱战波

来源：中国生物制品学杂志, 2021, 34(08): 949-954.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003414

• 牛病毒性腹泻病毒
• Npro蛋白
• 原核表达
• 生物信息学分析

目的研究牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea viruses,BVDV）N-端自身蛋白酶(Npro)的生物信息学特征及表达特性。方法克隆NADL株BVDV Npro基因,利用生物信息学软件分析其编码蛋白的理化性质、疏水性、跨膜区、信号肽、二级及三级结构,并进行原核表达、纯化及鉴定。将纯化的重组Npro蛋白免疫昆明小鼠,制备鼠抗Npro蛋白多克隆抗体,采用ELISA法、间接免疫荧光试验及Western blot法进行多克隆抗体效价、特异性及蛋白反应原性检测。结果 PCR扩增的Npro基因全长504 bp,编码168个氨基酸,Npro基因与BVDV V026株属于同一分支。Npro蛋白属于外膜蛋白,有亲水性,无信号肽,二级结构以β折叠和无规则卷曲为主。重组表达质粒pET-28a-Npro经PCR及酶切鉴定正确,测序结果与原序列一致;表达的重组Npro蛋白相对分子质量约25 000,纯化后纯度达95%以上,且免疫原性良好;制备的鼠抗Npro蛋白多克隆抗体效价为1∶128 000,特异性良好。结论成功在大肠埃希菌中表达了BVDV Npro蛋白,表达的Npro蛋白免疫原性良好,为进一步研究BVDV Npro蛋白的功能奠定了基础。

• 单位
  动物科技学院; 黑龙江八一农垦大学