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摘要
[目的]构建Fiber Knob原核表达载体，在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导其表达，纯化具有良好生物活性的Fiber Knob重组蛋白。[方法]从人55型腺病毒(HAdV-55)中通过PCR扩增目的基因片段Fiber Knob,将该片段与原核表达载体pET15b-His连接，构建重组原核表达质粒pET15b-Fiber Knob-His,转化大肠杆菌BL21(DE3)中，IPTG诱导表达目的蛋白，通过镍柱亲和层析对目的蛋白进行纯化，SDS-PAGE和Western Blotting检测目的蛋白的表达与纯度。ELISA检测目的蛋白的生物学活性。[结果]重组表达质粒经双酶切和测序鉴定证明构建正确。重组蛋白主要以包涵体形式存在，上清中也有少量表达，重组蛋白相对分子质量约为25 kDa且纯度95%以上，ELISA结果显示制备的Fiber Knob蛋白与CD46胞外域蛋白之间存在直接的相互作用，并且这种相互作用是剂量依赖性的。[结论]成功构建了原核表达质粒pET15b-Fiber Knob-His,在大肠杆菌中成功诱导表达了Fiber Knob蛋白，纯化的Fiber Knob蛋白具有明显结合CD46胞外域蛋白的生物学活性，为其单克隆抗体的制备及人55型腺病毒新的细胞受体的发现奠定了基础。
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