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摘要
目的：观察电头针干预对局灶性脑缺血大鼠缺血皮质区维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、辅助性T细胞(Th)17、调节性T细胞(Treg)的影响，从调控免疫细胞平衡的角度探讨电头针缓解缺血性脑卒中炎性损伤的分子机制。方法：将120只成年雄性SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电头针组、抑制剂组、激动剂组、电头针+激动剂组，每组各15只。采用线栓法复制大脑中动脉栓塞大鼠模型。电头针组取双侧顶颞前斜线(MS6)干预，频率2/100Hz，电流1mA，30min/次。抑制剂组给予RORγt抑制剂SR1001溶液(2.5mg/mL，10mg·kg-1)腹腔注射。激动剂组给予RORγt激动剂SR1078溶液(5mg/mL，5mg·kg-1)腹腔注射。激动剂+电头针组在腹腔注射SR1078溶液(5mg/mL，5mg·kg-1)基础上再行电头针干预，所有治疗均1次/d，连续7d。干预前、后对各组大鼠行神经功能缺损和神经行为学评分。实时荧光定量PCR法法检测脑组织中RORγtmRNA的表达；WesternBlot法检测脑组织中RORγt、IL-17A、IL-10和TGF-β1的表达；免疫组织化学法法检测脑组织中IL-6、IL-21的表达；免疫荧光法检测脑组织IL-17A+Th17和FOXP3+Treg细胞的荧光面积并计算其比值；TTC染色法检测脑梗死体积。结果：与假手术组比较，模型组神经功能缺损与神经行为学评分增高(P＜0.01)，RORγtmRNA及蛋白表达、IL-17A、IL-6、IL-21表达均升高(P<0.05)，TGF-β1、IL-10表达降低(P＜0.05)，IL-17A+Th17/FOXP3+Treg荧光面积比增高(P＜0.05)，脑梗死体积增大(P＜0.01)。与模型组比较，电头针组和抑制剂组神经功能缺损与神经行为学评分均降低(P＜0.01)，RORγtmRNA及蛋白表达、IL-17A、IL-6、IL-21表达均明显降低(P<0.05)，TGF-β1、IL-10表达增高(P＜0.05)，IL-17A+Th17/FOXP3+Treg荧光面积比降低(P＜0.05)，脑梗死体积显著缩小(P＜0.01)，但激动剂组神经功能缺损与神经行为评分增高(P＜0.01)，RORγtmRNA及蛋白表达、IL-17A、IL-6、IL-21表达均增高(P<0.05)，TGF-β1、IL-10表达降低(P＜0.05)，IL-17A+Th17/FOXP3+Treg荧光面积比增高(P＜0.05)，脑梗死体积显著增大(P＜0.01)。与激动剂组比较，激动剂+电头针组RORγtmRNA及蛋白表达、IL-17A、IL-6、IL-21表达均降低(P<0.05)，TGF-β1、IL-10表达明显增高(P＜0.05)，IL-17A+Th17/FOXP3+Treg荧光面积比降低(P＜0.05)，脑梗死体积缩小(P＜0.05)。结论：下调RORγt的表达，促进IL-17A+Th17/FOXP3+ Treg比例平衡可能是电头针缓解缺血性脑卒中炎性神经损伤的机制之一。
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