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摘要
目的 利用原核表达系统表达新型冠状病毒M蛋白，纯化后免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体，并与M真核质粒免疫效果相比较，为新型冠状病毒感染检测试剂盒的研制奠定基础。方法 将酶切鉴定正确的原核重组表达载体PMAT-9s-M转化BL21,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达M蛋白并进行鉴定。M蛋白经镍离子亲和层析柱纯化浓缩后免疫大白兔，制备多克隆抗体。将M真核重组质粒转化至DH5α,碱裂解法大量抽提质粒后免疫大白兔，制备多克隆抗体。采用ELISA检测2种抗血清的抗体效价，采用Western blot检测2种抗血清与M蛋白的反应性。结果 PMAT-9s-M转化BL21后表达70 ku的His-MBP-M融合蛋白，且该蛋白主要存在于包涵体中。纯化后免疫大白兔，制备的多克隆抗体血清效价与真核重组质粒免疫制备的抗血清抗体效价均达1︰16000,且2种抗血清均与凝血酶切M蛋白有良好反应性。结论 原核表达的M蛋白免疫制备的多克隆抗体特异性强，效价高，且重组M蛋白制备简便、经济高效，为新冠病毒感染诊断试剂盒的研制奠定了基础。
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单位基础医学院; 潍坊医学院
