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摘要
目的建立光镜-电镜关联方法观察腺病毒蛋白IX的细胞内定位。方法 miniSOG是新发现的能够被荧光显微镜和电子显微镜解析的蛋白标签。通过PCR方法克隆腺病毒结构蛋白Ⅸ与miniSOG的融合基因IXSOG,将其构建至真核表达载体,转染细胞;通过荧光显微镜确定IXSOG蛋白表达的细胞,之后对转染细胞进行原位固定、光氧化、制备超薄切片,用电镜观察细胞内IXSOG融合蛋白的表达及分布情况。结果在蓝光激发下,miniSOG能够发射绿色荧光。定位选择光氧化形成嗜锇颗粒的IXSOG表达细胞进行电镜观察,结果显示IX蛋白在细胞核内多个区域形成点状聚集或包涵体。结论建立了依赖miniSOG标签的的光镜-电镜关联方法,该方法可用于病毒蛋白细胞内定位研究。
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单位传染病预防控制国家重点实验室; 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
