干扰CASC9表达对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响及其与miR-195-5p/CCND1轴的关系

作者：梁峰; 张玮; 王胜杰; 黄晓梦; 岳磊; 武雪亮^*

来源：山东医药, 2021, 61(26): 1-5.

• 结直肠癌
• 长链非编码RNA
• 癌症易感性候选基因9
• miR-195-5p
• 内源竞争RNA

目的探讨长链非编码RNA癌症易感性候选基因9(CASC9)对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制与miR-195-5p细胞周期蛋白D1(CCND1)轴的关系。方法取人正常结肠黏膜上皮细胞系NCM460和结直肠癌细胞系SW480、SW620、HCT-116,采用实时荧光定量PCR法检测四种细胞中的CASC9的表达量。将CASC9表达量最高的结直肠癌细胞分为CASC9干扰组和干扰对照组,CASC9干扰组转染shRNA-CASC9,干扰对照组转染sh-NC。采用CCK-8法检测两组细胞增殖情况,流式细胞术检测两组细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-195-5p、CCND1 mRNA表达。使用StarBase数据库预测CASC9与miR-195-5p、miR-195-5p与CCND1的潜在结合位点,采用双荧光素酶报告基因检测法进行验证。结果与NCM460细胞相比,SW480、SW620、HCT-116细胞CASC9表达升高,其中SW480细胞CASC9表达高于SW620、HCT-116细胞(P均<0.01)。选择SW480细胞用于后续实验,CASC9干扰组细胞增殖能力较干扰对照组降低(P<0.01),细胞凋亡率较干扰对照组升高(P<0.05),miR-195-5p表达升高、CCND1 mRNA表达降低(P均<0.01)。StarBase数据库分析表明,CASC9可靶向吸附miR-195-5p;CCND1为miR-195-5p下游靶蛋白。荧光素酶报告基因结果显示,CASC9可与miR-195-5p特异性结合(P<0.01)。结论 CASC9在结直肠癌细胞中表达升高,其机制可能是CASC9作为miR-195-5p吸附海绵靶向调控CCND1表达,从而促进结直肠癌细胞的增殖并抑制其凋亡。

• 单位
  河北北方学院附属第一医院