大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养和分化能力鉴定

作者：周年; 刘波; 徐彭

来源：江西中医药, 2018, 49(05): 34-36+52.

• 骨髓间充质干细胞
• 标志物
• 鉴定

目的:分离培养大鼠骨髓细胞3代,考察其形态学、标志物及分化功能等生物特性,确定稳定分化能力的大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养方法。方法:取3月龄雌性大鼠,无菌条件下取胫骨、股骨骨髓,采用全骨髓贴壁培养法,以轻度细胞振荡筛选,培养细胞至第3代,显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表面标志物的表达,并通过碱性磷酸酶和矿化结节实验观察细胞的骨向分化能力,油红O染色及半定量实验观察细胞脂向分化的能力。结果与结论:全骨髓贴壁法刚分离的细胞,胞体透亮,大小不一,与周围的红细胞等血系细胞相互混杂,经轻度细胞振荡筛选,传代至第三代,细胞呈均匀分布的纺锤形平均生长,呈典型的漩涡状生长。流式细胞仪检测显示,CD90、CD29阳性表达率分别为96.4%…和78.5%…,而CD45、CD11b/c阳性比率分别为2.0%…和…1.9%。具有诱导碱性磷酸酶水平增加,出现矿化结节和诱导脂质累积的能力。表明全骨髓贴壁法培养的第3代骨髓细胞是具有骨向和脂向分化能力的骨髓间充质干细胞,可用作骨组织修复的种子细胞。

• 单位
  江西省中药药理学重点实验室; 江西省药品检验检测研究院; 江西中医药大学药学院; 江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心