LRG1通过CCR1促进类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞激活的机制研究

作者：庞琳烜; 谢荣华; 李治琴; 杜望磊; 丁进^*

来源：重庆医学, 2023, 52(17): 2570-2585.

• 类风湿性关节炎
• 富亮氨酸重复糖蛋白1
• 趋化因子受体1
• 增殖
• 侵袭
• 血管生成

目的 探讨富亮氨酸重复糖蛋白1(LRG1)对类风湿性关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖、迁移、侵袭及人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管生成的影响及机制。方法 将成纤维样滑膜细胞系MH7A细胞分为6组：对照组(未做任何处理)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组(20 ng/mL TNF-α处理细胞)、阴性对照干扰小RNA(NC siRNA)组(细胞转染NC siRNA后以TNF-α处理)、LRG1 siRNA组(细胞转染LRG1 siRNA后以TNF-α处理)、LRG1 siRNA+Vector组(细胞转染LRG1 siRNA和pcDNA3.1后以TNF-α处理)和LRG1 siRNA+趋化因子受体1(CCR1)组(细胞转染LRG1 siRNA和pcDNA3.1-CCR1后以TNF-α处理)。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞增殖能力；划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力；MH7A培养基处理HUVECs,采用血管形成实验检测血管生成能力；实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)和Western blot检测LRG1、CCR1 mRNA及蛋白表达水平。免疫共沉淀实验(Co-IP)检测LRG1与CCR1的相互作用。结果 与对照组比较，各浓度(5、10、20、40 ng/mL)TNF-α组LRG1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05),且20 ng/mL为最佳浓度。与NC siRNA组相比，LRG1 siRNA组细胞增殖能力[(137±15)%vs.(228±24)%,P<0.05]、迁移能力明显降低，侵袭细胞数明显减少[(56.0±6.7)个vs.(102.0±7.9)个，P<0.05]。沉默LRG1后HUVECs的血管形成能力明显降低。Co-IP结果显示，LRG1可与CCR1相互作用。沉默LRG1可下调CCR1表达水平(P<0.05),而过表达CCR1可逆转LRG1沉默对MH7A细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 LRG1通过CCR1促进MH7A细胞增殖、迁移、侵袭和HUVECs血管生成，为RA的治疗奠定了理论基础。

• 单位
  中国人民解放军空军军医大学; 咸阳市第一人民医院; 西京医院