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摘要
本研究旨在探究音猬因子(Sonic hedgehog, SHH)与羊毛弯曲形成的关系及其调控机制。本研究通过培养原代绵羊角质形成细胞，构建过表达和沉默载体，利用细胞转染、免疫共沉淀、实时荧光定量PCR和Western blot等方法探究SHH与羊毛弯曲的关系，分析SHH是否通过早期生长应答基因2(early growth response 2, EGR2/Krox20)调控胰岛素样生长因子结合蛋白5(insulin-like growth factor binding proteins 5, IGFBP5)来影响羊毛弯曲。结果显示，体外成功分离培养绵羊原代角质形成细胞，显微镜下呈“铺路石”样，免疫荧光鉴定结果呈阳性表达，CCK-8结果表明细胞生长曲线呈“S”型，符合细胞增殖趋势；过表达和沉默SHH后，羊毛弯曲相关基因KRT71、β-catenin和TCHH的表达量显著升高和降低；过表达Krox20后，羊毛弯曲相关基因的表达量显著升高；免疫共沉淀试验表明，在绵羊角质形成细胞中SHH可以与Krox20相互作用且正调控Krox20;实时荧光定量PCR和Western blot结果显示，过表达SHH后显著上调IGFBP5的相对表达量，沉默SHH后显著下调IGFBP5的相对表达量；过表达Krox20后IGFBP5的相对表达量显著升高。本研究表明，在绵羊角质形成细胞中SHH通过Krox20调控IGFBP5来影响羊毛弯曲，结果为毛发弯曲性状形成的相关分子调控机制提供了理论依据。
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