T7 RNA聚合酶表达系统的真核化及其偶联表达系统的建立

作者：郑海学; 靳野; 尹双辉; 郭慧琛; 尚佑军; 白兴文; 刘湘涛; 谢庆阁

来源：生物工程学报, 2007, (05): 947-952.

DOI：10.13345/j.cjb.2007.05.001

• 口蹄疫病毒
• IERS
• T7RNA聚合酶表达系统
• 偶联表达系统 foot-and-mouth disease virus
• T7 RNA polymerase expression system
• couple expression system

为了使T7RNA聚合酶(T7RNAP)表达系统真核化,首先,利用两种方法建立能够表达T7RNAP的真核细胞:(1)共转染表达T7RNAP的真核表达重组质粒于靶细胞;(2)利用稳定表达T7RNAP的BHK-21细胞系。然后,将FMDV内部核糖体进入位点(IRES)序列和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因定向克隆进原核载体pET-40a-c(+)的T7启动子下游,得到的重组质粒pIERS-EGFP-E。用该质粒分别转染上述两种细胞,在紫外显微镜下都能够观察到绿色荧光,表明真核化的T7RNAP偶联表达系统建立。并利用流式细胞仪对偶联表达水平进行了分析。这为利用该系统真核高效表达外源蛋白奠定了坚实的基...

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 农业部; 中国农业科学院兰州兽医研究所