右美托咪定减轻皮质酮抑制神经干细胞的增殖作用及机制

作者：潘一钊; 马君梅; 黄坚坚; 胡志妍; 梅虹霞; 林函^*

来源：温州医科大学学报, 2020, 50(02): 92-97.

• 皮质酮
• 右美托咪定
• 神经干细胞
• 细胞增殖

目的:探讨右美托咪定(DEX)减轻皮质酮(CORT)抑制神经干细胞(NSCs)的增殖作用及其可能的作用机制。方法:取孕15 d SD大鼠,分离胎鼠大脑皮质培养原代NSCs,进行NSCs标志蛋白神经上皮干细胞蛋白(Nestin)和胚胎干细胞关键蛋白(SOX2)染色鉴定;RT-PCR法检测肾上腺α-2受体各亚型α-2A受体、α-2B受体及α-2C受体在NSCs上的表达;将NSCs分为Control组、DMSO组、CORT组(CORT 1μmol/L孵育24 h)和DEX组(DEX 0.01、0.1、1μmol/L预处理1 h后,再加入CORT继续孵育24 h)。LDH法检测NSCs的细胞毒性;Ed U法检测细胞增殖能力;Western blot检测NSCs GSK-3β/β-catenin通路GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin和Cyclin D1表达水平。结果:分离的原代细胞经Nestin蛋白和SOX2蛋白染色鉴定NSCs的纯度超过97%;RTPCR结果显示肾上腺α-2受体的3种亚型在NSCs上均有表达;LDH法显示各组之间LDH的释放量差异无统计学意义。EdU法显示与Control组比,CORT组的NSCs增殖能力显著被抑制(P<0.05);与CORT组相比,当DEX剂量增加至1μmol/L时,NSCs的增殖能力有所恢复(P<0.05)。Western blot结果表明与Control组、DMSO组比,CORT组p-GSK-3β、β-catenin、Cyclin D1蛋白的相对表达量显著下降(P<0.05),与CORT组比,1μmol/L DEX预处理后,p-GSK-3β、β-catenin、Cyclin D1蛋白的相对表达量有所提升(P<0.05),Total GSK-3β蛋白在各组间的相对表达量没有明显变化;PI3K磷酸化抑制剂LY294002拮抗DEX对NSCs增殖的保护作用(P<0.05)。结论:DEX可以减轻CORT抑制NSCs的增殖作用,其机制与GSK-3β/β-catenin信号通路有关。

• 单位
  温州医科大学附属第二医院