地西他滨通过DNA甲基化调控增强结直肠癌细胞中miR-1271-5p的表达和作用

作者：杨晓莹; 刘嘉玉; 胡东来; 李元; 杨华; 楚元奎^*

来源：中国医院药学杂志, 2023, 43(18): 2016-2022.

DOI：10.13286/j.1001-5213.2023.18.04

• miR-1271-5p
• 结直肠癌
• 地西他滨
• DNA甲基化
• 细胞增殖和迁移

目的:探讨地西他滨(5-Aza-dC,decitabine, DAC)在结直肠癌细胞miR-1271-5p表达调控中的作用和机制。方法:生物信息学分析miR-1271-5p在结直肠腺癌组织和正常结直肠组织中的表达水平，荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人结直肠癌细胞系(SW620、HCT116和LOVO)和正常结肠上皮细胞NCM460中miR-1271-5p的表达水平。Western blot验证过表达miR-1271-5p后对HCT116和LOVO细胞增殖和迁移的作用。生物信息学软件预测miR-1271-5p启动子区甲基化岛，甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测miR-1271-5p启动子区的甲基化水平。使用DAC分别处理HCT116和LOVO细胞，MSP和qRT-PCR分别检测DAC对miR-1271-5p启动子甲基化状态和表达的影响。在2种结直肠癌细胞中转染miR-1271-5p抑制物(inhibitor),并同时使用DAC处理细胞，平板克隆实验、Transwell实验和Western blot实验检测细胞的增殖和迁移能力。结果:miR-1271-5p在结直肠腺癌组织和癌细胞中表达均显著下调。miR-1271-5p过表达可显著促进上皮细胞标志物E-cadherin的表达，抑制间质细胞标志物Vimentin及增殖标志物PCNA的表达。miR-1271-5p的启动子区存在多个甲基化岛，且结直肠癌细胞中miR-1271-5p启动子区的甲基化水平显著高于正常结直肠细胞。DAC处理后，HCT116和LOVO细胞中miR-1271-5p启动子区的甲基化水平显著降低，miR-1271-5p的表达显著增强，DNMT3B的表达显著降低。DAC可逆转miR-1271-5p低表达对结直肠癌细胞增殖和迁移的促进作用。结论:抑癌分子miR-1271-5p在结直肠癌细胞中的低表达与其启动子区的高甲基化状态有关，DAC可通过降低miR-1271-5p启动子区的甲基化水平增强其表达，并恢复其抑癌作用。

• 单位
  宁夏医科大学总医院; 宁夏医科大学