本发明公开了一种核酸编码的CAR-T细胞的制备方法。将修饰有胆固醇的DNA直接与细胞混合,37℃孵育;加入修饰有抗体的互补DNA链,混合均匀,37℃孵育,得到所述核酸编码的CAR-T细胞。所述制备方法反应条件简单,合成步骤少,耗时短,生产成本低。所述核酸编码的CAR-T细胞用于癌症治疗时,生物相容性好,毒副作用小,可控性强,灵活多变,可有效杀伤肿瘤细胞。本发明所述CAR-T细胞用于前期癌症治疗,具有潜在的应用价值。