人脐静脉内皮细胞永生化及生物学特性的研究

作者：李盛波; 郑勇斌^*

来源：中华实验外科杂志, 2019, (01): 60-62.

• 猿猴病毒40大T抗原
• 人端粒酶反转录酶催化亚基
• 反转录病毒载体
• 人脐静脉内皮细胞
• 永生化

目的 建立永生化人脐静脉内皮细胞(HUVECs)系并探讨永生化对HUVECs增殖、凋亡及成瘤性影响。方法 扩增并提取猿猴病毒40大T抗原(SV40LT)和人端粒酶反转录酶催化亚基(hTERT)基因,反转录病毒载体介导感染HUVECs；筛选2周；聚合酶链反应(PCR)扩增后行琼脂糖凝胶电泳成像鉴定目的基因是否转入HUVECs；细胞计数法比较细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡、裸鼠成瘤实验检测细胞恶性转化。结果 筛选出抗嘌呤霉素阳性克隆,SV40LT、hTERT成功转入HUVECs；永生化组细胞生长曲线上移,细胞增殖第5、6、7天,SV40LT永生化组及hTERT永生化组与HUVECs组细胞数目差异有统计学意义(P<0.05),hTERT永生化组和HUVECs组细胞数目差异有统计学意义(P<0.05)；HUVECs组细胞总凋亡率为(11.2±0.9)%,SV40LT永生化组HUVECs总凋亡率为(3.4±0.4)%,hTERT永生化组HUVECs总凋亡率为(2.8±0.4)%,SV40LT永生化组、hTERT永生化组凋亡率均低于HUVECs组(均P<0.05)；两种永生化细胞株不具成瘤性。结论 SV40LT、hTERT基因能使HUVECs发生永生化,永生化HUVECs增殖能力增强,凋亡率下降,无恶性转化。

• 单位
  武汉大学人民医院