前列腺癌恩杂鲁胺耐药细胞模型的构建及潜在耐药基因的初步筛选和验证

作者：冯涛; 魏德超; 赵佳晖; 李乾坤; 杨小兵; 李明川; 姜永光^*; 罗勇^*

来源：癌症, 2021, 40(11): 486-498.

• 去势抵抗型前列腺癌
• 恩杂鲁胺
• 内分泌耐药
• 趋化因子受体7
• 叉头螺旋转录因子3

背景与目的去势抵抗性前列腺癌阶段的恩杂鲁胺耐药问题是临床上亟待解决的难题。本研究旨在建立一种可用于体外研究的人前列腺癌(prostate cancer,PCa)恩杂鲁胺(enzalutamide Enza)耐药细胞模型并筛选相关耐药基因。方法采用MTT法检测雄激素非依赖的人PCa细胞株C4-2B的IC50值,确定Enza的初始处理浓度。然后,成倍增加Enza的初始浓度作用于C4-2B细胞,诱导建立PCa的Enza耐药细胞株(命名为C4-2B-ENZ)。应用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、M法评估C4-2BENZ细胞株的耐药情况。采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)及蛋白质免疫印迹检测耐药细胞株mRNA和蛋白质的表达情况。在此基础上,通过裸鼠体内成瘤实验,ELISA法检测人前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)和人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平,免疫组化检测Ki67水平,进一步验证C4-2B-ENZ细胞的耐药性。最后,应用高通量芯片技术进一步筛选C4-2B与C4-2B-ENZ细胞差异表达的基因。结果 C4-2B细胞的IC50值为1.2μmol/L,C4-2B-ENZ细胞的IC50为14.77μmol/L,其耐药指数为12.4,属于中度耐药。蛋白质免疫印迹和PCR结果显示,与C4-2B细胞相比,C4-2BENZ细胞中Enza耐药基因CXCR7、AKT、STAT3、FOXP3的mRNA及蛋白质高表达,而AR、Jagged1、Notch1低表达。与C4-2B细胞异质瘤相比,耐药细胞C4-2B-ENZ异质瘤Enza处理后,瘤体生长曲线(P=0.0296)、瘤体质量(P <0.0001)、VEGF水平(P=0.0003)、PSA水平(P <0.0001)、Ki67胞核染色阳性率(P=0.0007)均显著升高。芯片筛选结果显示,与C4-2B细胞相比,C4-2B-ENZ细胞中有653个基因表达显著差异,其中211个基因表达上调,443个基因表达下调。结论本研究建立了Enza耐药细胞模型并筛选出一些潜在的Enza耐药基因,为研究去势抵抗型前列腺癌耐药机制及药物靶点提供了研究线索。

• 单位
  首都医科大学附属北京安贞医院